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扩增片段限制性长度多态性基本原理与基本技术

发布时间:2016-05-17 点击:
基本原理
PCR技术能够扩增基因组中特定的序列多态性DNA片段。因为它们之间的碱基数目是一样的,直接用长度多态性分析技术无法鉴别。但可以利用两个片段之间的序列差异,而且这种差异刚好构成一个限制性核酸内切酶(restriction endonuclease)识别位点,或使原有的限制酶识别位点丢失或识别位点移动了位置,酶切后形成不同长度片段。就可用RFLP技术区分这两个不同序列的DNA片段。因为碱基顺序的差别造成限制酶识别位置及酶切位点数目的不同,选择合适的限制酶切割PCR产物,从长度不一的DNA酶切片段,可以判断等位基因及基因型(如图所示)。
基本技术
PCR-EFLP分析序列多态性主要分三个步骤:①先用PCR技术扩增含有序列差异的待测DNA片段;②根据靶片段序列特点,选用合适的限制酶切割PCR产物;③运用凝胶电泳分离酶切割产物,根据片段的数量和片段长度判定等位基因和基因型。