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聚合酶链式反应过程之金牌酶扩增

发布时间:2016-05-17 点击:
AmpliTaq Gold(TM )DNA聚合酶是一种商业化的修饰酶,需热激活(Birch et a1.,1996)。使用一个95℃,10~11分钟的预孵育过程使其具有活性。它的化学修饰是赖氨酸残基的五氨基衍生物(Innis及Gelfand 1999)。pH低于7.0条件下化学修饰衰退,酶活性恢复。在PCR反应中Tris缓冲液的pH对温度变化敏感,每升温loC导致溶液pH降低约0.02个pH单位(Innis及Gelfand,1999)。Tris缓冲液的pH在25℃为8.3,在95℃为6.9。如此一来,模板DNA变性的同时,酶被激活,也就不易发生引物二聚体和错配。
    
     需特别注意的是AmpliTaq Gold不适合常规AmpliTaq所使用的pH 9.0的缓冲液(Mo-retti et a1.,1998)。这是因为这种溶液的pH降得不够低,不能去除AmpliTaq Gold的化学修饰,酶仍没有活性。25℃时,pH在8.0—8.3的Tris缓冲液最适合AmpliTaq Gold。