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DNA的提取如何进行以及最常见的方法

发布时间:2016-05-17 点击:
从犯罪现场提取的血痕或精斑,或者是从嫌疑人或亲缘鉴定中提取的血液样本,这些生物检材除DNA外还包含许多物质。在分析DNA前,必须将DNA同其他细胞物质分离。细胞中包裹、保护DNA的细胞蛋白可抑制DNA分析。因此,DNA提取方法是将蛋白和其他细胞物质同DNA分子分离。另外,为了保证得到较好的结果,在进一步分析之前常需检测DNA的质和量。
    
目前法医DNA实验室最常见的三种DNA提取方法是:有机提取法、Chelex法和FTA卡(如图)。根据被检生物样本类型选用精确提取或DNA分离方法。例如,全血的提取方法与血痕、骨骼组织不同。
 
有机提取法,有时也称做酚.氯仿提取法,应用已很久,仍用于RFLP或PcR盼分析。用有机提取法可更有效地获得高分子量的DNA,这对RFLP来说是必需的。Chelex法比有机提取法更快捷。另外,Chelex法的步骤较少,可减少样本间的污染。chelex法获得的是单链DNA,只能用于PCR的检测。无论用哪种提取方法,所有样本都应该认真处理,以减少样本间或外源DNA的污染。在法医DNA分析过程中,提取过程是实验室中DNA样本最易被污染的阶段。因此,实验室经常要分时间段处理证据样本,有时甚至要在不同地方处理。
    
参照样本最常见的准备方法是将一滴血滴在棉布上制成1cm2大小的血痕。一滴血即10Ul的全血,其中,白细胞数量接近70000~ 80000个,基因组DNA近500ng。实际含量可因样本中白细胞数目和DNA提取过程的效率而改变。
 
已提取的DNA通常贮存在- 200C的冰箱中,如果要长期保存则存于- 800C的冰箱中,以防核酸酶的影响。核酸酶是在细胞中发现的一种酶,可以降解DNA以利核酸组分的再生。核酸酶的作用需镁离子的存在,因此,防止核酸酶消化血液DN酶裂解DNA。