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DNA定量之终点定量PCR(end-point PCR)

发布时间:2016-05-17 点击:
终点定量PCR是一种低成本的DNA样本“可扩增性”检测方法。这种方法中,单个STR基因座(Kihlgren et a1.,1998; Fox et a1.,2003)或人类基因组的其他区域如Alu重复单位,与已知浓度的DNA样本一同扩增。由已知浓度的样本生成标准曲线,与之比较得出未知样本的浓度。荧光染料如SYBR Green可用于检测生成的PCR产物。可根据荧光信号强度,在复合扩增DNA遗传标记之前调整DNA的量,从而获得优化的结果。这种方法也能指示样本中所含PCR反应抑制物的量。综上所述,每种定量方法都有各自的优缺点,可以结合现有的仪器设备和实验室的要求选择定量方法。
 
由美国国家标准和技术委员会组织的实验室间几种DNA定量方法的评估,可对多种方法租技术有一个更好的理解( Duewer et a1.,2001; Kline et a1.,2003)。研究表明,不同方法DNA浓度定量结果可相差达10倍(如图)。
(a)在74个实验室间比对研究中对Ing DNA样本检测得到的DNA浓度范围(Kline et al.,2003)。中位数接近于Ing,50%落在方框内。然而实验室反馈的DNA量为0.1~3ng。
(b)实验室各种检测方法的统一性和表观精确度的靶图。图例:A为ACES试剂盒;q为Quantiblot未知方法;E为Quantiblot用化学发光法检测;T为Quantiblot用比色法检测;方法1、2、3、4和5都仅有一个实验室应用
 
如果影响因素在两种之内,大部分的DNA定量方法如果操作得当则其结果是准确的。尽管准确的程度似乎不太可靠,定量的结果对于估计用于PCR扩增的DNA模板量仍是有效的。